Pokyny pro rozmrazování buněk
- Rychle rozmrazte zmrazené buňky (< 1 minuta) ve vodní lázni o teplotě 37 °C.
- Rozmrazené buňky před inkubací pomalu nařeďte pomocí předehřátého růstového média.
- Rozmražené buňky na misku s vysokou hustotou pro optimalizaci regenerace.
- Vždy používejte správnou aseptickou techniku a pracujte v digestoři s laminárním prouděním.
Proč se rozmrazování buněk provádí?
Je životně důležité buňky správně rozmrazit, aby byla zachována životaschopnost kultury a aby se kultura mohla rychleji zotavit. Některé kryoprotektory, jako je DMSO, jsou toxické při teplotách nad 4 °C. Proto je nezbytné, aby kultury byly rychle rozmraženy a naředěny v kultivačním médiu, aby se minimalizovaly toxické účinky.
Jaký je proces rozmrazování?
Rozmrazování je proces vyjmutí zmraženého produktu ze zmrazeného produktu na teplotu (obvykle vyšší než 0 °C), při které není žádný zbytkový led, tedy „rozmrazování“. Rozmrazování je často považováno za pouhé obrácení procesu zmrazování.
Jaký je nejlepší způsob zmrazení buněk?
Zmrazujte buňky pomalu snížením teploty na přibližně 1 °C za minutu pomocí kryo-mrazničky s řízenou rychlostí nebo kryo-mrazicí nádoby, jako je „Mr. Frosty, “k dispozici od Thermo Scientific Nalgene labware (Nalge Nunc). Vždy používejte doporučené mrazicí médium.
Jak rozmrazíte primární buňku?
Otřete vnější stranu lahvičky s buňkami 70% etanolem nebo isopropanolem. V biologické bezpečnostní skříni otočte uzávěrem o čtvrt otáčky, abyste uvolnili vnitřní tlak, a poté jej znovu utáhněte. Rychle rozmrazte buňky ve vodní lázni o teplotě 37°C jemným kroužením lahvičkou. Jakmile zbyde malé množství ledu, lahvičku vyjměte.
