Restrikční štěpení se provádí inkubací cílové molekuly DNA s restrikčními enzymy - enzymy, které rozpoznávají a vážou specifické sekvence DNA a štěpí se na specifické nukleotidy buď v rámci rozpoznávací sekvence nebo mimo ni rozpoznávací sekvence.
Jak tráví restrikční enzymy?
Restriction Enzyme Digest Protocol
- Přidejte součásti do čisté trubky v uvedeném pořadí: …
- Inkubujte reakci při teplotě štěpení (obvykle 37 °C) po dobu 1 hodiny.
- Zastavte štěpení tepelnou inaktivací (65 °C po dobu 15 minut) nebo přidáním 10 mM konečné koncentrace EDTA.
Stráví restrikční enzym DNA?
Restrikční enzymy lze také použít k vytvoření kompatibilních konců na produktech PCR. …Ve všech případech je použit jeden nebo více restrikčních enzymů k štěpení DNA, což vede k nesměrové nebo směrové inzerci do kompatibilního plazmidu.
Jak fungují restrikční enzymy DNA?
Jak fungují restrikční enzymy? Jako všechny enzymy funguje restrikční enzym přizpůsobením tvaru do tvaru Když přijde do kontaktu se sekvencí DNA s tvarem, který odpovídá části enzymu, nazývané rozpoznávací místo, obalí se kolem DNA a způsobí přerušení obou řetězců molekuly DNA.
Jaký enzym štěpí DNA?
Tyto enzymy se nazývají restrikční endonukleázy nebo restrikční enzymy a jsou schopny štěpit molekuly DNA v pozicích, ve kterých jsou přítomny konkrétní krátké sekvence bází.
