Pro snížení vazby nespecifických protilátek a v důsledku toho snížení signálu pozadí se doporučuje použít blokovací roztok před inkubací s protilátkami Nejúčinnější blokovací roztok bude být to, které obsahuje sérum ze stejného druhu, ve kterém byla vypěstována sekundární protilátka.
Jak zabráníte skvrnám na pozadí?
Snížení tloušťky tkáňových řezů může pomoci snížit zabarvení pozadí. Zkuste řezat tenčí části pro čistší IHC. Je také důležité dbát na to, aby části nevyschly, protože sušení může vést k vysokému nespecifickému zabarvení.
Jak optimalizujete imunofluorescenci?
Imunofluorescenční mikroskopie: 10 technických tipů pro úspěch
- Fixace a permeabilizace buněk. …
- Specificita protilátek. …
- Použijte vhodné ředění protilátky. …
- Optimalizace vyrovnávací paměti a blokovacích agentů. …
- Použití vhodné hustoty buněk. …
- Vícenásobné barvení. …
- Sekundární protilátky. …
- Zmenšení pozadí.
Co způsobuje skvrny na pozadí?
Zbarvení pozadí může být způsobeno nevhodnou vazbou protilátky nebo chybami při přípravě tkáňového sklíčka.
Snižují sekundární protilátky signály pozadí?
F(ab) specifické sekundární protilátky mohou pomoci snížit signál pozadí tím, že eliminují nespecifickou vazbu proteinů IgG nalezených v tkáních sekundární protilátkou.
