Test Bimolecular Fluorescence Complementation (BiFC) je metoda používaná k přímé vizualizaci interakce protein-protein in vivo pomocí zobrazení živých buněk nebo fixovaných buněk. … BiFC byl poprvé popsán Hu et al.
Jak funguje komplementace bimolekulární fluorescence?
Funkční princip BiFC je založen na vývoji fluorescenčního komplexu, který je výsledkem spojení dvou segmentů fluorescenčního proteinu, když jsou v těsné blízkosti v důsledku interakce protein-protein ve fragmentech, tzn., v BiFC je fluorofor rozdělen na amino a karboxylový terminál.
Co je test BiFC?
test bimolekulární fluorescenční komplementace (BiFC) umožňuje jednoduchou a přímou vizualizaci proteinových interakcí v živých buňkách (45). Přístup BiFC je založen na tvorbě fluorescenčního komplexu, když dva proteiny fúzované k nefluorescenčním fragmentům fluorescenčního proteinu vzájemně interagují (obr.
Proč se test BiFC provádí?
Myšlenka BiFC je vyjadřovat poloviny GFP fúzované s vašimi zájmovými proteiny Pokud se body zájmu vzájemně ovlivňují, můžete obě poloviny spojit a získat funkční GFP. Takže pokud je v buňce exprimována jedna polovina GFP, nepřekvapuje mě, že ji protilátka GFP dokáže detekovat.
Je BiFC reverzibilní?
Nevratnost komplexů BiFC byla dobře zdokumentována (10) a zdá se, že většina, ne-li všechny, systémy BiFC na bázi fluorescenčních proteinů jsou nevratné (8, 33, 43, 48–51).
