Jaký je nejlepší způsob oddělení chloroplastů od pufru?

2024 Autor: Fiona Howard | [email protected]. Naposledy změněno: 2024-01-10 06:35

Aby bylo možné extrahovat pigmenty z chloroplastů jsou suspendovány v izolačním pufru. Abychom mohli pigmenty z chloroplastů extrahovat, musíme se nejprve zbavit pufru. Jaký je nejlepší způsob, jak oddělit chloroplasty od pufru? použijte centrifugu k oddělení

Jak izolujete chloroplast?

Při metodě izolace chloroplastů se buněčná stěna rozbije mechanicky pomocí mixéru nebo homogenizátoru. Potom se neporušená listová tkáň a buněčné zbytky odstraní filtrací. Chloroplasty se shromáždí odstředěním s použitím gradientu percoll.

Jak vyrobíte chloroplastový izolační pufr?

Připravte požadované množství 1X chloroplastového izolačního pufru zředěním 2X tlumivého roztoku 1:1 vodou dH2O Přidejte 10 µl 10% roztoku BSA na ml 1X chloroplastu Izolační vyrovnávací paměť. Těsně před použitím přidejte 1 µl DTT na 1 ml chloroplastového izolačního pufru. Označte tento buffer jako 'Complete Buffer'.

Co je v chloroplastovém izolačním pufru?

DNA izolační pufr sestával z 100 mM NaCl, 100 mM Tris-HCl (pH 8,0), 50 mM EDTA a 1 mM DTT Lyse chloroplastů byla získána inkubací chloroplastová peleta s 8 ml DNA izolačního pufru, 1,5 ml 20% SDS, 20 µl 2-merkaptoethanolu a 30 µl Proteinázy K (10 mg/ml) do centrifugační zkumavky při 55 °C po dobu 4 hodin.

Jaké je pH pufru použitého k homogenizaci listů špenátu v protokolu izolace chloroplastů?

Špenát je nabitý dobrými chloroplasty a snadno se izolují. Listy budete muset vložit do studeného mixéru s 0,1 M fosfátovým pufrem, pH 7,5 a 0,5 M sacharózy, aby nepraskly.